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听过使用液相的同学吐槽:“液相虐我千百遍,我待液相如初恋。”
我的观点是:你是否有hold住她,不只在于你要待她如初恋,
更必须要深入地了解她,剖析她,才能最后做到从容地驾驭她。
所以,接下来的很多期内容,
我们会由浅入深的,循序渐进的去了解液相色谱的原理,构造、操作方法,
希望能帮到你哦。
液相色谱的核心是什么?
是的,色谱柱!因为分离是色谱的核心功能。
在上期讲到发现色谱那个俄国哥们,
1903年用碳酸钙作为分离基质,石油醚做流动相来分离植物色素,
发现了色谱这个方法。
他都没有用到什么泵啊,进样器啊,检测器啊之类的东西。
在这个实验里面,重力就是泵,带着流动相往前走;
样品直接放置的“柱”头;眼睛就是检测器,分辨不同颜色的条带。
绝大多数现代的色谱柱里面是细小的硅胶小球,
小球的表面布满了C18或者C8的链。
碳链根据不同化合物的亲水性不同,对化合物的吸附能力不同,
所以在流动相的带动下,
不同化合物跑出色谱柱的时间也不一样,从而完成分离。
现代的色谱柱里面的硅胶小球颗粒很小(5um),
导致色谱柱比较致密,光靠重力流动相是流不过柱子的,
所以需要有一个泵把流动相打过去。
色谱柱的硅胶小球越密,把流动相打过去需要的力量越大,
这就是为什么2um的小粒径柱的出现,
直接让液相从HPLC发展到UPLC的原因。
因为hplc已经没有足够的力量把流动相打过那么致密的柱子了。
为啥填料粒径越来越小呢?
我们后面会专门有一段来解释的。
有了泵把流动相打过色谱柱,他们就形成了一个高压的体系,
在这个体系里面,怎么引入要分析的样品,
又不中段流路、破坏这个高压体系呢?
聪明的工程师们想出了各种办法,制造了手动进样器和自动进样器。
色谱柱对样品的分析,受温度的影响很大。
所以我们就把色谱柱放在一个可以控制温度,
保持恒定温度的一个盒子里,
就是柱温箱了。
我们要分析的样品,
我们的眼睛都看不见的,
而且色谱柱,管线都没有透明的,
所以我们需要在色谱柱后面,放一个裁判,
帮我们记录不同化合物跑出来的时间以及出峰的大小,
这就是检测器了。
你看,这就是一个完整的液相了:
有提供流动相前进动力的泵,
有负责将样品引入系统的进样器,
有负责给色谱柱温暖呵护的柱温箱,
还有色谱柱后面站着的,
手拿计时器和计数器的裁判—-检测器。
最后裁判把记录的结果电脑上的一个叫做工作站的人,
他再做数据的计算和存储。
你看,液相的组成是不是很简单呢?
你已经走出hold她的第一步了!
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