记得有次在在线课程的微信群讨论时，

有同学问我关于液相色谱柱的再生问题。

今天就来给大家讲讲如何进行色谱柱的再生。

通常情况下，

对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低需要考虑再生时，

建议大家用以下流程来进行冲洗：

···········♦ 1 ♦···········

20倍柱体积水：乙腈= 95%：5%

（用于移除系统中缓冲盐，可根据常用缓冲盐浓度调整比例）

···········♦ 2 ♦···········

20倍柱体积 乙腈

···········♦ 3 ♦···········

5倍柱体积 异丙醇

···········♦ 4 ♦···········

20倍柱体积 正己烷

···········♦ 5 ♦···········

20倍柱体积 乙腈

20倍柱体积 水：乙腈=95%：5% （可与步骤1保持相同的比例）

···········♦ 6 ♦···········

用所需的流动相比例重新平衡色谱柱

关于色谱柱的再生，我相信大家能看到很多相关文章，

建议大家可以根据实际需求来选择再生条件。

Elsa 老师今天要和大家讲的是关于上文给出的条件的柱体积的问题。

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实际上在色谱柱冲洗时，

很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。

例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。

然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。

例如这次提到的20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱是指什么呢？

其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。

·  【公式如下】  ·

•

通过公式就很容易算出柱体积了，

例如一根4.6mm内径，150 mm柱长的色谱柱柱体积为：

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如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈，

假设你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈冲洗34分钟。

当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。

不知道这样的解释大家能理解么？

以后在色谱学堂微信群和大家讨论色谱柱冲洗时，

记得不要只和我说你曾经冲洗色谱柱用多少时间，

还要说流量哦！

最后提醒大家，

冲洗色谱柱时，色谱柱的尾端不要接检测器，

接一个可以收纳废液的容器就行了。