♦关键词♦    有机酸C18分不开  

虽然液相系列才推出了两集，但后台已经收到很多关于液相色谱的提问。

其中这个有机酸的方法优化案例很有代表性，和大家一起来分析一下。

也欢迎大家给灵姐姐留言，提出你的看法。

@蓝南：“一直在关注色谱学堂，最近跑液相遇到了问题，跑有机酸峰挨的太近，不好分开！

七月买的zorbaxsb_aq的柱子，条件都试过，用了乙腈和pH2.0的缓冲液，效果不佳。

现在是甲醇加pH2.3的能分开九种酸里的六种，现在是抗坏血酸和乳酸分开了一点，但估计不能做积分处理，

昨天试过1.8的，结果两个峰之间的乳酸被盖住了，三个峰变成两个了。

5min-6min的三个峰分别是抗坏血酸，乳酸，莽草酸。

想请教色谱君，不想换柱子，还能有什么方法能让抗坏血酸和乳酸完全分开？”

如果一定要用C18柱分析有机酸，第一件事情是要抑制有机酸的电离。

有机酸的pKa值在3.5-4.5左右，因此缓冲盐需要设在pH2附近。

一般C18柱的pH耐受范围是2-8，所以这里你选了耐酸的Zorbax SB_aq的柱子，pH耐受范围1-8，是对的。

但是仍然有三个靠前出峰的化合物不能分离，是什么原因呢？

我们来看一下这三个化合物的结构。

首先这三个化合物能和C18固定相作用的基团都非常少，只有一两个甲基或亚甲基，也就是保留会很弱。

虽然实际上结构差异很大，但主要是极性基团，尤其是羟基的差别。

这种情况，其实非常适合用HILIC模式来分析。

使用水溶性的流动相，能够溶解样品。

和布满硅羟基的硅胶柱，能够保留样品。

没有一根色谱柱能分离所有的化合物。

虽然C18柱的使用非常普遍，但也不用执着于非它不可，不然干嘛要发明那么多种柱子呢！

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