液相色谱系列LC07丨不会用制备液相的兔子，不是好侦探

 

小兔子朱迪是动物城新入职的警察，

为了证明自己，

她决心侦破一桩神秘案件。

在追寻真相的道路上，

意外发现阴谋背后竟然是这样一种药剂。

这到底是什么呢？

 

朱迪把药剂样品带到好朋友小佳的实验室，

想让她用核磁和红外分析一下样品的结构。

却被告知纯度不够，还需要用制备液相做一下纯化。

 

那么，什么叫制备液相呢？

和制备液相对应的，是分析液相。

它们的最大差别，不在于外形，而在于目的。

分析液相的目的当然是为了分析样品，

有什么成分，含量多少，也叫做定性定量。

要做好分析液相，

最关注的是分离度和灵敏度，要分得开，测得到，测得准。

而制备液相是利用色谱柱的分离能力，来去除杂质，

得到高纯样品。

 

为什么强调纯度呢？

在实验室里，红外、紫外、核磁这些仪器，

都要求样品达到足够的纯度，才能得到准确的结果。

 

除了实验室，药品的生产也需要纯化，

特别是生物制品和药剂。

很多生物制品如果是直接吃下去，跟吃个鸡蛋也没什么不同，

直接注射才能保留活性成份。

而注射治疗，药物会直接进入血液，

所以纯度非常重要。

 

在实验室里，用于制备的液相，

配置和普通的分析液相差不多。

有泵，有进样器，有柱子，有检测器。

为了收集分离出来的化合物，

制备液相通常还配一个馏分收集器。

 

馏分收集器就像液相色谱的收纳盒，

把每次分析的同类物质收纳到一起。

馏分收集器可以直接串联在检测器后面。

也可以连接一个三通，和检测器并联，都接在色谱柱的后面。

有些实验室里需要收集的量很大，

一个馏分收集器装不完，还可以并联好几个。

根据检测器的信号显示，

当化合物出峰的时候，仪器会自动收集。

一般按照时间编程，

也可以根据检测器的信号强度自动触发。

一个个化合物通过馏分收集器收集到小瓶或者试管里，

也可以通过管路连接到更大的瓶子。

制备液相有很多种分类方法，

比如按压力分类，或者按产量分类，

彼此之间有交叉，没有明确的标准。

 

不同类型的制备液相有着不同的特点。

比如这根用在生产上的制备液相柱，

模样和实验室里有些不同。

仅仅内径就有1.6m，色谱柱的重量有36吨重，

每天消耗的流动相能放满半个小游泳池。

 

除了特别大的，还有特别小的。

比如微克级制备，也常被称为微量制备，

它的有趣之处在于微量馏分收集器，

可以直接使用MALDI点样板。

同学们还记得在MALDI-TOF那一集中的介绍吗？

MALDI实现离子化的关键是将样品和基质混合，

再点在靶板或叫点样板上，

用激光打击基质，就可以实现离子化。

而现在的微量馏分收集器，

可以将Nano液相分离之后的化合物直接点在MALDI的点样板上，

并且自动的添加基质。

这样无缝连接的合作，

即发挥了液相的分离纯化功能，又简化了MALDI的样品制备，

在生命科学和药物分析领域都有着非常广阔的应用前景。

不论是制备液相还是相关的联用技术，

都还在不断的发展和进步，

不断的更新和突破，

所以给出的建议常常处于变化之中。

科学本来就不是一个能一锤定音的事情，

也欢迎大家给我们留言，提出你的见解！

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